T100 PCR儀(聚合酶鏈式反應儀)是分子生物學領域中用于體外擴增特定DNA片段的核心設備，通過模擬DNA自然復制過程，在數小時內將微量DNA樣本擴增至數百萬至數十億倍，被廣泛應用于基因檢測、疾病診斷、科研探索及工業(yè)生產等領域。
 

　　T100 PCR儀通過精確控制反應體系的溫度變化，驅動DNA變性、退火、延伸三個關鍵步驟的循環(huán)進行，具體過程如下：
 

　　變性(Denaturation)：
 

　　溫度升至94-98℃，持續(xù)20-30秒，使DNA雙鏈解旋為單鏈，為后續(xù)引物結合提供模板。
 

　　退火(Annealing)：
 

　　溫度降至50-65℃(依引物Tm值調整)，持續(xù)20-40秒，特異性引物與單鏈DNA的互補區(qū)域結合，標記擴增起點。
 

　　延伸(Extension)：
 

　　溫度升至72℃(Taq DNA聚合酶最適溫度)，持續(xù)30秒至2分鐘，聚合酶沿引物方向合成新鏈，完成DNA復制。
 

　　循環(huán)次數：通常進行25-40個循環(huán)，每輪循環(huán)DNA數量呈指數增長(理論擴增倍數=2n，n為循環(huán)數)。
 

　　根據功能與設計差異，PCR儀可分為以下類型：
 

　　1.傳統(tǒng)梯度PCR儀
 

　　特點：通過金屬塊均勻加熱/冷卻，配備梯度溫度模塊，可同時設置不同退火溫度，快速優(yōu)化反應條件。
 

　　應用：適合引物設計初期，篩選最佳退火溫度(如基因克隆、突變體篩選)。
 

　　2.實時熒光定量PCR儀(qPCR)
 

　　核心升級：集成熒光檢測系統(tǒng)，實時監(jiān)測擴增產物積累，實現定量分析。
 

　　技術分支：
 

　　SYBR Green法：熒光染料嵌入DNA雙鏈，非特異性檢測所有擴增產物。
 

　　探針法(TaqMan)：使用特異性熒光探針，僅標記目標序列，靈敏度達1-10拷貝/μL。
 

　　應用：病毒載量檢測(如HIV、HPV)、基因表達分析、SNP分型等。
 

　　3.數字PCR儀(dPCR)
 

　　原理創(chuàng)新：將反應體系分割為數萬個微反應單元(如微滴、芯片孔)，通過終點法統(tǒng)計陽性單元比例，實現絕對定量。
 

　　優(yōu)勢：無需標準曲線，抗干擾能力強，可檢測低至0.001%的突變頻率。
 

　　應用：液體活檢(循環(huán)腫瘤DNA檢測)、轉基因成分定量、環(huán)境微生物監(jiān)測等。