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熒光定量PCR儀相關對照問題的處理

更新時間:2018-04-23瀏覽:3568次
   熒光定量PCR儀相關對照問題的處理
  1.陰性對照和陽性對照都出現陽性擴增帶
  原因:
 ?、訇幮詷悠泛蚉CR反應試驗污染。
 ?、陔娪旧蠘訒r避免PCR產物漂移到其他孔而影響結果判定。
  解決方法:
  ①更換全部試劑,必要時更換所有移液器。
 ?、趹⌒牟僮鳎颦傊悄z加厚,增加每孔的容量,可避免加樣液的溢出。
  2.陽性對照呈陰性
  原因:
  ①陽性樣品或加入陽性模板失效。無論是組織還是血清,凍融1次后病原數量明顯減少。
 ?、诩尤朐噭┝坎粶蚀_或遺忘了某一成分。
  解決方法:
 ?、賹㈥栃詫φ諛悠贩殖尚“b。每個包裝夠用1次好。
  ②仔細核對試驗記錄,校對移液器。
  3.出現非特異擴增帶
  原因:
 ?、贅悠纺0辶窟^多。
 ?、谝锘騎aqDNA聚合酶多。
 ?、坻V離子濃度過高或退火溫度過低。
  解決方法:
  依據熒光定量PCR儀具體實驗的情況,分析上述可能出現的原因,采取相應的措施。
  4.陽性對照擴增帶弱
  原因:
  ①電泳時瓊脂糖中EB含量少或長時間后再用已失效。
 ?、跀U增效率不高。
  解決方法:
 ?、偈菍傊悄z放入含有EB電泳液中再染30 min后再觀察。
 ?、跈z測儀器是否正常工作。
 ?、墼黾蛹兓疍NA或cDNA樣品的稀釋倍數。
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